DNA 추출 방법 및 절차

고등학교:

원리:

1. NaCl 용액에 용해된 DNA를 침전시킵니다.

2. 불순물이 적은 DNA를 추출하려면 차가운 알코올을 사용하세요.

3.DNA는 끓는 수조에서 디페닐아민에 의해 파란색으로 염색됩니다.

방법 단계:

1. 핵 물질 추출: 시계 방향으로 약간 빠르게, 약간 더 무겁게 저어줍니다. 5분

2． DNA 용해:

3. DNA가 함유된 점성물질 침전 : 증류수 300mL, 시계반대방향으로 천천히 저어줍니다

4. 여과: 끈적끈적한 물질을 취한다

5. 재용해: 시계 방향으로 천천히 저어줍니다. 3분

6． 여과: 여과액을 취합니다.

7. 불순물이 적은 DNA를 추출하고 시계 반대 방향으로 약간 천천히 저어줍니다. 5분

8． DNA 식별 : 수욕 5분간 끓이기

대학

DNA 추출은 기본적으로 3단계로 나누어지며, 각 단계의 구체적인 방법은 시료의 종류에 따라 결정되며, 추출 및 후속 단계에 영향을 미치는 물질은 다양합니다.

분쇄 또는 초음파 처리를 사용하여 세포를 파괴하고 세제를 추가하여 막 지질을 제거합니다.

프로테아제, 아세테이트 침전 또는 페놀/클로로포름 추출을 추가하여 DNA에 결합된 히스톤과 같은 세포내 단백질을 제거합니다.

DNA를 차가운 에탄올이나 이소프로필 알코올에 침전시키면 DNA는 알코올에 녹지 않고 서로 달라붙기 때문에 염분도 제거할 수 있습니다.

이 밖에도 현재 흡착컬럼 방식을 이용해 DNA를 추출하는 상용 키트도 나와 있다.

2. 세포 파괴

박테리아는 단단한 세포벽을 갖고 있어 세포가 먼저 파괴되어야 합니다. 세 가지 방법이 있는데, ① 기계적 방법: 초음파 처리, 분쇄, 균질화 ② 화학적 시약 방법: SDS로 세포를 처리합니다. ③ 효소적 방법: 리소자임이나 헬리카제를 첨가하면 세포벽이 파괴될 수 있습니다.

3. 다양한 DNA 추출 방법

(1) 농축염법

A. 전해액에서 RNA와 DNA의 서로 다른 용해도를 활용 이 둘을 분리하는 일반적인 방법은 1M 염화나트륨으로 추출하는 것이다. 얻은 DNP 점액을 소량의 옥탄올이 함유된 클로로포름과 흔들어 유화시킨 후 원심분리하여 단백질 겔을 제거한다. 수상에 머무르고 클로로포름상 중간에 DNA가 수상상부에는 95 에탄올의 2배 부피를 사용하여 DNA 나트륨 염을 침전시킬 수도 있습니다.

B. 0.15 MNaCL 용액을 사용하여 세포파괴액을 반복적으로 세척하여 RNP를 제거한 후 1M NaCL로 디옥시리보스 단백질을 추출한 후 클로로포름---이소알코올법에 따라 단백질을 제거합니다.

비교 두 가지 방법 중 후자의 방법이 핵산의 분해를 덜 일으킬 수 있다.

다. 묽은염산 용액에서 DNA를 추출할 때 SDS 등의 세제를 적당량 첨가하면 단백질과 DNA를 분리하는 데 도움이 된다. 추출 과정에서 조직 내 DNase에 의한 DNA 분해를 억제하기 위해 염화나트륨 용액에 금속 이온의 용해제로 구연산 나트륨을 첨가하는데, 일반적으로 15M NaCL, 0.015M 구연산 나트륨을 통칭하여 SSC 용액이라고 합니다. (2) 음이온성 세제법: 단백질을 변성시키기 위해 SDS나 자일산나트륨 및 기타 세제를 사용하며, 세포 내 DNA와 단백질은 종종 정전기적 인력에 의존하기 때문에 DNA를 직접 추출할 수 있습니다. 조정 음이온성 세제는 이러한 원자가 결합을 파괴할 수 있으므로 DNA 추출에 일반적으로 사용됩니다

(3). 페놀은 단백질 변성제 역할을 하며 동시에 DNase 분해를 억제합니다. 균질액은 페놀로 처리됩니다. 단백질과 DNA 사이의 결합이 깨졌기 때문에 단백질 분자의 표면에는 페놀과 유사하고 호환되는 많은 극성 그룹이 포함되어 있습니다. 단백질 분자는 페놀 상에 용해되는 반면 DNA는 수성 상에 용해됩니다. 원심분리 후 물 층을 꺼내고 이 과정을 여러 번 반복한 다음, DNA가 포함된 물 층을 결합하여 알코올에 녹지 않는 핵산의 성질을 이용하여 DNA를 침전시킵니다.

이때 DNA는 점성이 매우 높은 물질이므로 유리와 함께 공 모양으로 굴려 꺼낼 수 있습니다. 이 방법의 특징은 추출된 DNA를 자연상태로 유지하는 것이다

(4). 물추출법 : 물에 녹는 핵산의 성질을 이용하여 조직세포를 파쇄한 후 낮은 농도의 물을 사용한다. - 소금용액으로 RNA를 제거한 후 침전물을 물에 녹여 DNA를 완전히 녹인 후 원심분리하여 상등액을 모아 2.6M의 부피로 조정한다. 그런 다음 66, 80, 95 에탄올과 구리 프로필렌으로 각각 세척하고 최종적으로 공기 중에서 건조하여 이 방법으로 추출된 DNA 샘플을 얻으므로 일반적으로 DNA 샘플을 얻을 수 없습니다. 이 방법을 사용하면 추출 과정에서 SDS를 추가하여 단백질을 제거할 수 있습니다.